Rolul modelelor de primate non-umane in descoperirea si dezvoltarea clinica a modulatorilor selectivi ai receptorilor de progesteron (SPRM)

Progesteronul joaca un rol crucial in controlul diverselor functii de reproducere. Este ligamentul natural al receptorului de progesteron (PR), care este exprimat in diferite tesuturi din corp, predominant in tractul reproducator. Izolarea progesteronului in 1934 [1–3] a dus la cautarea unor progestine sintetice, active pe cale orala (agonisti PR) care au gasit aplicatii largi in controlul fertilitatii si in terapia hormonala. De la descoperirea mifepristonei in 1981 de catre oamenii de stiinta ai lui Roussel Uclaf [4], mai multi antagonisti de progesteron (PA) au devenit disponibili pentru evaluarea preclinica si clinica [5]. Mai recent, modulatorii selectivi ai receptorilor de progesteron (SPRM) au fost sintetizati si caracterizati biologic. SPRM-urile reprezinta o noua clasa de liganzi PR care exercita un agonist progesteron selectiv pentru tesut relevant din punct de vedere clinic, antagonist,situatie in vivo in functie de actiunea biologica studiata [6]. Asoprisnil (J867), un nou compus steroid care apartine clasei de stratriene substituite cu 11β-benzaldoxime [7, 8], este studiat la femeile cu leiomomata uterina simptomatica si endometrioza. Prezinta specificitate ridicata in PR, activitate agonista / antagonista de PR mixta si grad ridicat de selectivitate uterina la modelele animale si la oameni [8]. Spre deosebire de AP-uri, asoprisnil nu provoaca travaliu in modele relevante de sarcina si nastere.

Studiile efectuate pe maimutele cynomolgus au furnizat primele dovezi ca SPRM-urile substituite cu 11β-benzaldoxime pot induce amenoree prin tintirea directa catre endometru si au efecte antiproliferative endometriale directe, indiferent de ciclurile ovulatorii aflate in desfasurare [9]. Efectele endometriale ale SPRM si AP-urilor sunt specifice primatelor menstruante (maimutele din Lumea Veche, oameni), deoarece au fost observate efecte variabile la speciile care nu sunt menstruante (rozatoare, iepuri, resturi de copaci si maimute din Lumea Noua) [9]. Efectele antiproliferative endometriale si efectele vasculare specifice ale endometrului au fost ulterior confirmate la femeile tratate cu asoprisnil [10]. Studiile la om au aratat, de asemenea, ca asoprisnil a imbunatatit simptomele leiomomatei, reducerea volumului de leiomiom [11] si reducerea durerii asociate cu endometrioza [12]. In aceasta scurta recenzie,

Asoprisnil si SPRM-uri legate structural (figurile 1 si 2) au fost identificate la EnTec GmbH si Jenapharm GmbH (Jena, Germania) in timpul unui program de descoperire a medicamentelor SPRM („mesoprogestin”) [13]. Scopul acestui program a fost gasirea liganzilor PR cu agonist / antagonist mixt de PR, efecte antiproliferative asupra endometrului, fara efecte antiglucocorticoide si activitate abortificanta slaba sau absenta pentru tratamentul tulburarilor ginecologice. Programul de screening a inclus o serie de studii de legare a receptorilor si o ierarhie a testelor in vivo. Selectia compusilor candidati a fost realizata in principal pe modele de animale, inclusiv cobai si gravide, gravide, sobolani si maimute. Evaluarea efectelor endometriale a fost de o importanta cruciala pentru selectia finala a compusilor candidati. Aceasta evaluare a fost efectuata in macacuri de cynomolgus si rhesus, deoarece endometrul acestor maimute arata asemanari izbitoare cu cea a femeilor in ceea ce priveste reglarea hormonala si modificarile morfologice in timpul ciclului menstrual [14]. Pe baza datelor din studiile la animale generate in cadrul acestui program, a fost posibila clasificarea noilor SPRM si a compusilor de referinta in functie de prezenta si absenta activitatilor partiale de agonist si antagonist PR (Figura 3). Compusii cu activitate agonista de PR ridicat au avut activitate abortiva scazuta si capacitate ridicata de a suprima efectele estrogenului in uter [13]. Asoprisnil (J867) a fost selectat pentru o dezvoltare ulterioara bazata pe efectele sale pronumice de agonist PR si antiproliferative endometriale si absenta activitatii care provoaca forta de munca.

Endometrul primat este un tesut extrem de specializat compus din diferite componente celulare, incluzand epiteliu luminal si glandular, stroma endometriala, celule limfoide si non-limfoide si vase de sange [15]. Endometrul este probabil cel mai dinamic tesut din corpul uman. La om si primate menstruante („lumea veche”), endometrul sufera modificari ciclice caracterizate prin regenerare si proliferare in faza foliculara a ciclului ovarian, diferentiere secretorie in faza luteala si menstruatie insotita de vasoconstrictie a arterelor spirale si modificari ale matricei extracelulare care apar dupa declinul fiziologic al concentratiilor de progesteron care apar la sfarsitul fazei luteale. Arterele spirale sunt vasele cheie care controleaza menstruatia [16]. Aceste vase sunt unice pentru endometrul primat si sunt foarte sensibile la progesteron. Se pare ca sunt controlate de celule stromale perivasculare (pericite), care prezinta o densitate foarte mare de PR [17].

Estrogenul este mitogenul primar din endometru, care actioneaza in principal asupra epiteliului. Tratamentul cu estrogen „nepozitionat” (fara o faza progestinica) duce la proliferarea celulelor glandulare si stromale si poate duce la hiperplazie endometriala si, eventual, cancer endometrial. Hiperplazia endometriala se caracterizeaza printr-o proliferare crescuta a epiteliului glandular endometrial, rezultand o crestere a raportului glanda / stroma. Progesteronul si progestinele sintetice se opun efectelor estrogenului asupra epiteliului si, astfel, protejeaza endometrul de dezvoltarea hiperplaziei. Mecanismele specifice care au fost propuse pentru a explica actiunea antiproliferativa a progesteronului asupra epiteliului uterin includ: (i) reglarea in jos a receptorilor de estrogen (ER) in tesuturile tinta, (ii) inducerea enzimei endometriale 17β-hidroxisteroid dehidrogenaza de tip 2 care catalizeaza conversia estradiolului in estrona mai putin activa, (iii) reducerea expresiei proteice specifice indusa de estrogen si (iv) inhibarea proto-oncogenei induse de estrogen (cjun, cfos), care actioneaza ca factori de crestere in endometru (revizuit de [9]). Desi toate mecanismele par a fi implicate, reglementarea in jos a ER in tesuturile tinta joaca cel mai probabil rolul principal in acest sens.

In timpul programului de descoperire a medicamentului, am efectuat studii pe maimutele cynomolgus pentru a determina efectele SPRM-urilor selectate in endometrul primat [13]. Unul dintre studiile noastre initiale a comparat efectele endometriale ale unui SPRM „model” cu activitate agonista ridicata (J1042) cu cele ale PAs (ZK 137 316 si ZK 230 211). Acest studiu a aratat ca toti cei trei compusi au un efect antiproliferativ profund asupra endometrului caracterizat printr-o scadere a grosimii endometriale si o reducere a activitatii mitotice atat in ​​epiteliul endometrial cat si in stroma. Stroma endometriala a aparut compacta in toate grupele de tratament, ceea ce a sugerat un efect antagonist al progesteronului J1042 si PA-urile de referinta [9, 18]. Cu toate acestea, J1042, dar nu PA-urile de referinta, activitate secretorie indusa a glandelor endometriale caracterizata prin sacculare glandulara cu vacuolizare si secretie subnucleara, ceea ce sugereaza un efect agonistic al progesteronului slab. In schimb, ambele AP-uri au produs modificari degenerative in glandele endometriale, fara modificari secretorii. In plus, studiile morfometrice au aratat ca J1042 a redus diametrul intraluminal al arterelor spirale din bazalis intr-un grad mai mare decat PA, dar nu a provocat degenerarea hialinizanta a arterelor spirale, asa cum sa observat anterior la animalele tratate cu PA. Acest studiu, care a aratat pentru prima data prezenta efectelor secretorii partiale ale unui SPRM in endometrul primat, a jucat un rol cheie in conceptualizarea si descoperirea selectivitatii tisulare a SPRM. In schimb, ambele AP-uri au produs modificari degenerative in glandele endometriale, fara modificari secretorii. In plus, studiile morfometrice au aratat ca J1042 a redus diametrul intraluminal al arterelor spirale din bazalis intr-un grad mai mare decat PA, dar nu a provocat degenerarea hialinizanta a arterelor spirale, asa cum sa observat anterior la animalele tratate cu PA. Acest studiu, care a aratat pentru prima data prezenta efectelor secretorii partiale ale unui SPRM in endometrul primat, a jucat un rol cheie in conceptualizarea si descoperirea selectivitatii tisulare a SPRM. In schimb, ambele PA au produs modificari degenerative in glandele endometriale, fara modificari secretorii. In plus, studiile morfometrice au aratat ca J1042 a redus diametrul intraluminal al arterelor spirale din bazalis intr-un grad mai mare decat PA, dar nu a provocat degenerarea hialinizanta a arterelor spirale, asa cum sa observat anterior la animalele tratate cu PA. Acest studiu, care a aratat pentru prima data prezenta efectelor secretorii partiale ale unui SPRM in endometrul primat, a jucat un rol cheie in conceptualizarea si descoperirea selectivitatii tisulare a SPRM. dar nu a provocat degenerarea hialinizanta a arterelor spirale, asa cum se observase anterior la animalele tratate cu PA. Acest studiu, care a aratat pentru prima data prezenta efectelor secretorii partiale ale unui SPRM in endometrul primat, a jucat un rol cheie in conceptualizarea si descoperirea selectivitatii tisulare a SPRM. dar nu a provocat degenerarea hialinizanta a arterelor spirale, asa cum s-a observat anterior la animalele tratate cu PA. Acest studiu, care a aratat pentru prima data prezenta efectelor secretorii partiale ale unui SPRM in endometrul primat, a jucat un rol cheie in conceptualizarea si descoperirea selectivitatii tisulare a SPRM.

Studiile toxicologice cronice efectuate in maimutele de cynomolgus intacte, cu durata de 39 de saptamani, au aratat in mod constant efecte antiproliferative endometriale ale asoprisnilului [8] si ecopatului asoprisnil (J956) (date nepublicate). In studiul toxicologic de 39 de saptamani, asoprisnil a fost administrat oral o data pe zi, la maimutele intacte de cynomolgus, in doze de 20, 60, 160 si 480 mg / kg / zi. La aceste doze, expunerea sistemica a medicamentului la maimutele de sex feminin ca zona sub curbele de concentratie plasmatica (ASC) combinate pentru medicamentul parinte si J912, un metabolit major, au fost 1116, 5345, 16816 si, respectiv, 28838 ng • h / mL. In comparatie cu animalele de control, acest tratament a indus amenoree si atrofie endometriala profunda (stadiu proliferativ timpuriu), care a fost insotit de o tendinta catre aspectul stromal mai compact, fara nicio dovada de modificari secretorii la nivelul glandelor endometriale (figura 4). Acest efect a fost observat la femelele din toate grupurile tratate cu asoprisnil (n = 4-5), cu exceptia femeilor din grupul cu cea mai mare doza in care efectul a fost observat la 4 dintre cele 5 femei. Activitatea menstruala a fost suprimata la toate femelele tratate cu asoprisnil in termen de 2 saptamani de la inceperea tratamentului. Concentratiile medii de ser de estradiol au fost la niveluri foliculare timpurii.

Efectul asoprisnilului asupra morfologiei endometriale a fost, prin urmare, studiat mai detaliat la maimutele cynomolgus tratate cu doze mai mici de asoprisnil pentru o perioada mai scurta de timp [19]. Un total de 24 de animale ovariene intacte, ciclice, au fost administrate fie cu solutie salina (n = 6), fie vehicul (n = 4) sub forma de controale, fie trei doze de asoprisnil (10 mg / kg [n = 4], 30 mg / kg [ n = 4] si 90 mg / kg [n = 6]) pe cale orala, o data pe zi, timp de 90 de zile. Patru animale din fiecare grup au fost sacrificate la sfarsitul tratamentului si doua animale din fiecare dintre grupurile saline si 90 mg / kg au fost tinute fara tratament pentru o perioada de recuperare de 28 de zile dupa care au fost, de asemenea, sacrificate. In acest studiu, asoprisnilul a fost suspendat intr-un vehicul continand 10% etanol, 35% PEG (polietilenglicol) 300 si 55% Cremophor-EL (polioxietilengliceroltriricinoleat 35, ulei de ricin polioxil 35) pentru imbunatatirea absorbtiei sale orale. ASC la aceste doze la maimutele de sex feminin au fost 368, 2495 si, respectiv, 13422 ng • hr / ml. Intregul tract reproductiv a fost indepartat de la toate animalele si evaluat pentru modificarile histologice generale, inclusiv dezvoltarea arterei spirale, grosimea endometriala si compactarea stromala. Grosimea endometriala a fost evaluata prin masurarea distantei de la suprafata luminala la granita miometriala, iar compactarea stromala a fost cuantificata prin evaluarea computerizata a numarului de celule stromale pe unitatea de suprafata. Efectele asupra starii proliferative au fost cuantificate prin evaluarea a doi markeri de proliferare, Ki-67 si histona fosforilata 3 (Fosfo H3). Ki-67 este o proteina nucleara exprimata in toate etapele ciclului celular, cu exceptia G0 si este un indice standard al proliferarii celulare globale. Deoarece histona 3 este fosforilata doar in timpul mitozei si este exprimata doar in cromozomi mitotici, colorarea cu fosfo H3 ofera o indicatie directa a activitatii mitotice [20]. Au fost de asemenea evaluate efectele asoprisnilului asupra histologiei ovariene, cervicale si vaginale.

Array

In acest studiu, ovarele in controlul salin si vehicul au fost in totalitate normale, marcate fie de foliculi antrali, fie de corpus lutea functionala. Endometria la toate animalele de control a fost fie in fazele proliferative, fie secretorii. Cu toate acestea, la animalele tratate cu asoprisnil, cele doua doze mai mari au suprimat ovulatia si secretia de progesteron. Studiul toxicologic precedent de 39 de saptamani a aratat ca estradiolul a fost mentinut la nivelurile fazei foliculare, iar in studiul curent, vaginul a fost intr-o stare estrogenizata (evaluata dupa gradul de cornificare) la toate animalele tratate cu asoprisnil, indicand ca (i) estradiol nivelurile au fost adecvate fiziologic si (ii) asoprisnil nu a blocat actiunea estrogenului in vagin.

Cu toate acestea, toate dozele de asoprisnil au suprimat semnificativ markerii de proliferare Ki-67 (Figura 5) si Fosfo-H3 (Figura 6) in glandele endometriale, iar cele doua doze mai mari au provocat contractia semnificativa a grosimii endometriale (Figurile 7, 8) fara a induce efecte progestative, cum ar fi sacularea si secretia glandulara. Nu a existat o tendinta de compactare stromala, dar nici o dovada de degenerare a arterei spirale. In concluzie, asoprisnil a avut un efect antiproliferativ endometrial, dar spre deosebire de PA, nu a indus nici o compactare stromala severa sau degenerarea arterei in spirala.

In concluzie, asoprisnil a avut efecte antiproliferative antivulatorii si endometriale reversibile, dar nu a suprimat actiunea estrogenului in alte parti ale tractului reproducator al macacurilor de cynomolgus intacte ovariene.

Studiile din faza I si faza II au confirmat efectele selective ale tesutului asoprisnilului in uterul uman. Unele dintre studiile clinice cu asoprisnil au fost publicate [10] sau raportate in forma abstracta [11]; [21]; [12].

Intr-un studiu de faza I, efectele asoprisnilului fata de placebo au fost evaluate la 60 de femei sanatoase in ciclu de premenopauza in timpul tratamentului timp de 28 de zile, la doze orale zilnice cuprinse intre 5 mg si 100 mg / zi, incepand din primele doua zile ale ciclului menstrual. [10]. Asoprisnil a prelungit constant ciclul menstrual in doze ≥ 10 mg / zi. Cu toate acestea, efectele asupra progesteronului in faza luteala indicative ale luteinizarii au fost inconsistente si au lipsit dependenta de doza. Nivelurile de estradiol ale femeilor tratate cu asoprisnil au fost in intervalul fazei foliculare. Acest studiu a demonstrat ca asoprisnil suprima menstruatia, vizand in principal endometrul.

Intr-un cadru de faza II, efectele asoprisnilului 5 mg, 10 mg si 25 mg asupra modelelor de sangerare si a diferitelor obiective ale leiomiomului au fost evaluate intr-un studiu dublu orb, controlat cu placebo, la pacientii cu leiomomata uterina [11]. Pacientii au fost tratati timp de 3 luni. Asoprisnil a suprimat in mod semnificativ atat durata si intensitatea sangerarii uterine intr-o maniera dependenta de doza, dupa cum se evidentiaza prin jurnalele de sangerare, cat si rate ridicate de amenoree (0%, 28,1%, 64,3% si 83,3% la placebo, 5 mg, 10 mg si 25 mg, respectiv). A fost o crestere semnificativa a concentratiilor de hemoglobina pana la saptamana 12 la toate grupurile de asoprisnil in comparatie cu placebo. De asemenea, Asoprisnil a redus semnificativ scorurile de menoragie la pacientii cu leiomomata [21]. Efectele suprimate ale asoprisnilului asupra sangerarii endometriale au fost evidente in prima luna si s-au mentinut pe intreaga perioada de tratament. Aceste efecte au fost insotite de o reducere dependenta de doza a volumului celui mai mare leiomom masurat prin ecografie. Asoprisnil nu a avut efecte semnificative statistic asupra estrogenilor ovarieni (estradiol si estrona). In concordanta cu absenta activitatii antiglucocorticoide la om in doze relevante din punct de vedere clinic, nu au existat cresteri ale concentratiilor serice de cortizol sau dehidroepiandrosterona sulfat (DHEA-S) cu asoprisnil [11, 22].

In studiile de faza I si II, biopsiile endometriale obtinute de la femeile tratate cu studii de asoprisnil au aratat o diferentiere asincrona a epiteliului si stromului endometrial in concordanta cu activitatea sa agonista / antagonista a progesteronului mixt. Aceste modificari nu au fost observate anterior cu niciun alt tratament hormonal. Mai mult, aceste biopsii nu au putut fi evaluate utilizand criteriile Noyes de datare endometriala [23], asa cum a fost planificat initial. Prin urmare, un grup de experti de patologi ginecologici in colaborare cu Laboratoarele de Citologie Diagnostica, Indianapolis, IN, a dezvoltat doua noi categorii de diagnostic care descriu efectele specifice ale asoprisnilului asupra endometrului. Prima categorie, „efect secretor fiziologic”, se caracterizeaza prin efecte secretorii slabe asupra glandelor endometriale, fara cifre mitotice si efecte variabile asupra stromului endometrial, de la compactarea stromala la modificarile predecidale focale. A doua categorie, „model secretor, tip mixt”, difera de prima categorie prin prezenta unor figuri mitotice izolate in glandele endometriale. Aceste aparitii au fost deja evidente dupa tratamentul cu asoprisnil timp de 28 de zile la doze de 5 mg si mai mari si au devenit mai frecvente dupa tratament timp de 3 luni [24]. Cresterea frecventei tiparelor secretionale fiziologice nu a fost insotita de o scadere a tiparelor proliferative [10]. Ocazional, glandele dilatate umplute cu material secretor si acoperite de epiteliu inactiv au fost observate fara dovezi de modificari hiperplastice [24]. Interesant este ca grupurile de neobisnuite “

In rezumat, asoprisnil a demonstrat efecte antiproliferative asupra endometrului in prezenta concentratiilor de estradiol in faza foliculara atat la om, cat si la maimute. Cu toate acestea, aceste studii au relevat, de asemenea, unele diferente intre modelele de primate non-umane si oameni in ceea ce priveste efectele endometriale. In endometrul uman, tratamentul cu asoprisnil timp de 3 luni a fost asociat cu efecte secretorii non-fiziologice in epiteliul glandular si prezenta vaselor arteriale „cu pereti grosi” neobisnuiti in stroma [24]. In maimutele cynomolgus nu au fost observate modificari secretorii in glandele endometriale si nici formarea arterelor spirala cu pereti grosi endometriali, evidentiind unele diferente importante in farmacologia receptorilor steroizi a maimutei si a endometrului uman. Motivul acestor diferente nu este clar. In orice caz, Studiile noastre cu asoprisnil si experienta anterioara cu AP-uri sugereaza ca endometrul macac ar putea fi mai sensibil la liganzii PR decat endometrul uman, ceea ce ar explica efectele mai dramatice ale SPRM si AP-urilor la aceste animale. Prin urmare, in ciuda multor similitudini intre maimuta si endometru uman, este necesara prudenta la extrapolarea datelor generate de primatele neumane la oameni.

Efectele potentiale ale SPRM asupra tesutului san sunt de interes special. La primate, dezvoltarea glandei mamare este controlata de o interactiune complexa intre hormonii reproductivi (estradiol, progesteron si prolactina) si factorii locali de crestere [25]. Exista dovezi din ce in ce mai mari ca progesteronul este un mitogen important in celulele mamare epiteliale [26]. Pe de o parte, PA-urile suprima proliferarea glandelor mamare si inhiba cresterea tumorilor PR-pozitive ale glandelor mamare la modelele animale [27]. Pe de alta parte, activitatea mitotica in varfurile normale ale tesutului mamar in timpul fazei luteale, iar progestinele sintetice cresc in mod constant densitatea mamara mamara, care este un parametru surogat al proliferarii sanilor [28, 29], precum si regrupeaza expresia markerilor de proliferare in glanda mamara [30].

Efectele inhibitoare ale asoprisnilului asupra dezvoltarii glandelor mamare au fost observate constant intr-un studiu toxicologic de 39 de saptamani la maimutele cynomolgus feminine intacte [31]. Desi aceste efecte sunt in concordanta cu efectele antiproliferative ale asoprisnilului asupra proliferarii glandelor mamare, acestea ar trebui interpretate cu prudenta din cauza dozelor mari utilizate in studiile toxicologice si a diferentelor potentiale dintre macaci si oameni cu privire la reglarea hormonala a proliferarii si diferentierii mamare.

Studiile noastre asupra primatelor non-umane si oamenilor analizati mai sus au relevat faptul ca asoprisnilul si alte SPRM-uri substituite cu 11β-benzaldoxime exercita efecte selective asupra tesutului asupra uterului, in prezenta concentratiilor de estrogen in faza foliculara si fara efecte antiglucocorticoide. Acesti compusi pot elimina sangerarea endometriala si pot suprima proliferarea endometriala atat la macaci, cat si la oameni. Efectele inhibitoare ale cresterii leiomomului au fost observate in studiile la om cu asoprisnil. Studiile noastre arata ca asoprisnilul prezinta efecte inhibitoare asupra (i) sangerarii endometriale, (ii) proliferarii endometriale si (iii) volumului leiomomului la om, predominant prin mecanisme specifice tesutului (uterin). Aceste efecte, discutate mai detaliat mai jos, sunt susceptibile sa reflecte manifestarea specifica a tesutului tinta a modulatiei PR care afecteaza caile din aval de PR,

Controlul sangerarii endometriale

Amenoreea a fost observata in mod constant la maimutele cu cynomolgus tratate cu asoprisnil [8]. La femei, amenoreea a fost deja observata in termen de 30 de zile de la inceperea tratamentului cu asoprisnil, indiferent de efectul luteinizarii care sugereaza ovulatia. Acest efect este sustinut pe durata unui tratament mai indelungat, cu anomalii minime de sangerare, cum ar fi depistarea si sangerarea progresiva [10, 11]. Aceste observatii sugereaza ca arterele endometriale sunt stabile in timpul tratamentului cu asoprisnil.

Desi mecanismul amenoreei induse de asoprisnil nu este inca inteles complet, probele actuale sugereaza ca asoprisnil poate avea un efect inhibitor direct sau indirect asupra arterelor spiral endometriale. Interesant este ca schimbarile morfologice induse de asoprisnil in arterele spiralate, caracterizate prin ingrosarea peretelui, difera in mod clar de cele observate frecvent la femei care folosesc progestine cu actiune lunga sau sisteme intrauterine care contin levonorgestrel. Aceste tratamente sunt asociate cu formarea de microvesseli „cu pereti subtiri” care sunt foarte fragile si duc frecvent la sangerare progresiva [32–34]. Ipoteza noastra de lucru este ca asoprisnilul controleaza sangerarea endometriala, vizand celulele perivasculare din endometru, care sunt caracterizate printr-o densitate ridicata de PR [17]. Aceasta ipoteza,

Efect antiproliferativ endometrial

Asoprisnilul si SPRM-urile legate structural au efecte antiproliferative endometriale la macaci si la oameni. Mecanismul exact al acestui efect inca nu este pe deplin inteles. Efectele asoprisnilului asupra endometrului uman sunt in prezent cercetate folosind diverse obiective morfologice, imunohistochimice si moleculare. Aceste studii ar trebui sa ofere mai multe informatii asupra mecanismelor moleculare care stau la baza acestui efect, in special rolul activitatilor partiale ale progesteronului si al activitatilor antagoniste ale asoprisnilului in endometru. Pe baza experimentelor efectuate pe maimutele cynomolgus, am propus anterior ca efectul antiproliferativ endometrial al SPRM si PA poate fi datorat reducerii fluxului sanguin endometrial ca urmare a modificarilor vasculare din endometru [9]. In orice caz, aceasta ipoteza nu a fost inca confirmata la om.

• cortana blue porn
• divinity original sin 2 porn
• markiplier porn
• aeolus porn
• southern belle porn
• big tit sister porn
• forced sister porn
• bioshock little sister porn
• asphyxiation porn
• gay trucker porn
• young bbw porn
• daisy chain porn
• tumblr amateur porn video
• ruby ridge porn
• aida cortes porn
• vanessa kirby porn
• fortnite lesbian porn
• ok ko let’s be heroes porn
• nonk porn

Mai recent, rolul AR endometrial a fost subliniat ca un potential mecanism al efectelor antiproliferative endometriale ale PA-urilor [35–38]. Se stie ca androgenii inhiba efectele estrogenului in endometrul primat [38]. Ipoteza AR a fost propusa pe baza observarii unei expresii mult imbunatatite a AR in glandele endometriale ale macacurilor tratate cu diferite PA si la femeile tratate cu mifepristona [35]. In plus, antagonistul AR flutamida a inversat efectul antiproliferativ endometrial al PA, astfel cum este evidentiat de modificarile indicelui mitotic, inaltimea si greutatea endometriala [39]. Deoarece reglarea AR a fost observata in stroma endometriala a maimutelor cynomolgus tratate cu asoprisnil, efectul sau antiproliferativ asupra epiteliului glandular endometrial poate fi mediat de factorii de crestere stromala mediati de AR [19]. In plus, asoprisnilul are proprietati androgene slabe, care pot juca un rol in acest sens [8].

Reducerea volumului de leiomom

Cateva mecanisme, care sunt in curs de investigare, ar putea fi implicate in reducerea volumului de leiomiom indus de asoprisnil, incluzand efecte antiproliferative directe si pro-apoptotice asupra celulelor leiomomiei, inhibarea factorilor de crestere, modularea sintezei extracelulare, reducerea fluxul sanguin uterin etc.

Rezultatele unui studiu in vitro cu leiomomom si culturi celulare primare miometriale au aratat ca asoprisnil inhiba proliferarea si induce apoptoza celulelor leiomomomului fara a avea efecte asupra celulelor miometriale normale [40]. In acest studiu, markerul de proliferare PCNA a fost utilizat pentru a cuantifica efectele asupra proliferarii, in timp ce testul TUNEL a fost utilizat pentru a determina efectele asupra apoptozei. Intr-un al doilea studiu, asoprisnil a inhibat, de asemenea, expresia EGF, IGF-I, TGFβ3 si a receptorilor acestora in celulele de leiomiom cultivate, fara a afecta expresia lor in potrivirea celulelor miometriale [41]. In plus, o scadere a fluxului sanguin uterin dupa tratamentul cu asoprisnil poate contribui la acest efect. Aceasta ipoteza este in prezent evaluata in studiile clinice.

Baza moleculara pentru efectul selectiv de tesut al SPRM-urilor

Mecanismul molecular al selectivitatii tisulare a modulatorilor receptorilor steroizi a fost propus recent pe baza capacitatii unui PR ligandat de a interactiona cu diferite coregulatoare, in functie de ligandul specific [42–45]. Coregulatorii (coactivatori si corepresori) sunt proteine ​​nucleare care formeaza complexe multiple cu receptori nucleari si moduleaza activitatea lor transcriptionala [46-49]. Coactivatorii intensifica activitatea transcriptionala a receptorilor nucleari, in timp ce corepresorii provoaca efecte inhibitoare asupra receptorilor nucleari. PA-urile favorizeaza interactiunea PR cu corepresoare sau inhiba interactiunile cu coactivatori, in timp ce agonistii „puri” PR promoveaza interactiunea receptorului nuclear cu coactivatorii [50, 51]. SPRM cu activitate partiala de agonist PR induc o stare intermediara de interactiune intre receptorii nucleari si coactivatori [45, 50, 52]. Deoarece disponibilitatea atat a coactivatorilor, cat si a corepresoarelor depinde de mediul tesutului si hormonal, diferentele specifice tipului de celule si ale promotorului in recrutarea coregulatorului determina selectivitatea tesutului a SPRMs [6, 45]. Studii moleculare mai recente arata ca PR-ligand asoprisnil promoveaza recrutarea coactivatorului SRC-1 intr-un model in vitro [53], care ar putea explica efectele agoniste partiale observate la modelele animale si la oameni. Studii moleculare de exprimare a coregulatorului in tesuturile umane expuse asoprisnilului sunt in desfasurare. Aceste studii ar trebui sa ofere mai multe informatii asupra mecanismului molecular al selectivitatii tisulare a asoprisnilului in uter. Deoarece disponibilitatea atat a coactivatorilor, cat si a corepresoarelor depinde de mediul tesutului si hormonal, diferentele specifice tipului de celule si ale promotorului in recrutarea coregulatorului determina selectivitatea tesutului a SPRMs [6, 45]. Studii moleculare mai recente arata ca PR-ligand asoprisnil promoveaza recrutarea coactivatorului SRC-1 intr-un model in vitro [53], care ar putea explica efectele agoniste partiale observate la modelele animale si la oameni. Studii moleculare de exprimare a coregulatorului in tesuturile umane expuse asoprisnilului sunt in desfasurare. Aceste studii ar trebui sa ofere mai multe informatii asupra mecanismului molecular al selectivitatii tisulare a asoprisnilului in uter. Deoarece disponibilitatea atat a coactivatorilor cat si a corepresoarelor depinde de tesutul si mediul hormonal, diferentele specifice tipului de celule si ale promotorului in recrutarea coregulatorului determina selectivitatea tesutului a SPRMs [6, 45]. Studii moleculare mai recente arata ca PR-ligand asoprisnil promoveaza recrutarea coactivatorului SRC-1 intr-un model in vitro [53], care ar putea explica efectele agoniste partiale observate la modelele animale si la oameni. Studii moleculare de exprimare a coregulatorului in tesuturile umane expuse asoprisnilului sunt in desfasurare. Aceste studii ar trebui sa ofere mai multe informatii asupra mecanismului molecular al selectivitatii tisulare a asoprisnilului in uter. diferentele de tip de celule si de promotor in recrutarea coregulatorului determina selectivitatea tesutului SPRMs [6, 45]. Studii moleculare mai recente arata ca PR-ligand asoprisnil promoveaza recrutarea coactivatorului SRC-1 intr-un model in vitro [53], care ar putea explica efectele agoniste partiale observate la modelele animale si la oameni. Studii moleculare de exprimare a coregulatorului in tesuturile umane expuse asoprisnilului sunt in desfasurare. Aceste studii ar trebui sa ofere mai multe informatii asupra mecanismului molecular al selectivitatii tisulare a asoprisnilului in uter. diferentele de tip de celule si de promotor in recrutarea coregulatorului determina selectivitatea tesutului SPRMs [6, 45]. Studii moleculare mai recente arata ca PR-ligand asoprisnil promoveaza recrutarea coactivatorului SRC-1 intr-un model in vitro [53], care ar putea explica efectele agoniste partiale observate la modelele animale si la oameni. Studii moleculare de exprimare a coregulatorului in tesuturile umane expuse asoprisnilului sunt in desfasurare. Aceste studii ar trebui sa ofere mai multe informatii asupra mecanismului molecular al selectivitatii tisulare a asoprisnilului in uter. Studii moleculare de exprimare a coregulatorului in tesuturile umane expuse la asoprisnil sunt in desfasurare. Aceste studii ar trebui sa ofere mai multe informatii asupra mecanismului molecular al selectivitatii tisulare a asoprisnilului in uter. Studii moleculare de exprimare a coregulatorului in tesuturile umane expuse asoprisnilului sunt in desfasurare. Aceste studii ar trebui sa ofere mai multe informatii asupra mecanismului molecular al selectivitatii tisulare a asoprisnilului in uter.

Studiile la primatele non-umane au jucat un rol cheie in conceptualizarea si descoperirea selectivitatii tisulare a SPRM-urilor. Ele au furnizat primele dovezi ale efectelor antiproliferative endometriale ale asoprisnilului si ale altor SPRM-uri substituite cu 11β-benzaldoxime in modelul primat, caracterizat printr-o scadere a numarului mitotic, a expresiei Fosfo H3 si a grosimii endometriale. Aceste modele au aratat, de asemenea, ca modularea PR conduce la o interactiune complexa cu raspunsurile mediate de ER si AR. Efectele selective ale uterului asoprisnilului au fost confirmate in studiile clinice la om. Studiile clinice efectuate la voluntari sanatosi (faza I) si la pacientii cu leiomomata au aratat ca asoprisnil induce inhibarea dependenta de doza a sangerarii uterine in principal din cauza unui efect endometrial. In plus, Studiile noastre din faza II au aratat ca asoprisnil reduce volumul de leiomomata uterina intr-un mod dependent de doza. Desi mecanismul acestui efect nu este pe deplin explorat, studiile in vitro cu culturi de celule primare ale leiomomului, precum si investigatiile morfologice ale tesutului de leiomom sugereaza o crestere a apoptozei insotita de o scadere a proliferarii dupa tratamentul cu asoprisnil. Aceste efecte par a fi specifice celulelor, deoarece nu au fost observate astfel de modificari in celulele miometriale.

Asoprisnil induce „efecte secretorii non-fiziologice” asupra endometrului uman in timpul tratamentului pana la 3 luni. Aceste efecte sunt in concordanta cu efectele antiproliferative endometriale ale asoprisnilului, fara dovezi de modificari hiperplastice. Cu toate acestea, studiile pe termen lung cu asoprisnil vor fi necesare pentru a evalua pe deplin efectele endometriale ale asoprisnilului.

Figura 1 este o amabilitate a lui Alexander Hillisch (TnTec GmbH, Jena, Germania). Multumim, de asemenea, lui Gretchen Bodum ca a editat manuscrisele si comentariile expertilor.

Aceasta lucrare a fost sustinuta de TAP Pharmaceutical Products Inc, Lake Forest, IL 60045, SUA.

Aceasta lucrare a fost prezentata partial in cadrul reuniunii anuale a Societatii pentru Investigatii Ginecologice (SGI), martie 2005, Los Angeles, CA.

Acest articol a fost publicat ca parte a Biologiei reproducerii si a endocrinologiei Volumul 4, Suplimentul 1, 2006: Biologia de baza si aplicata a tractului reproductiv primat: in onoarea carierei Dr. Robert M Brenner. Continutul complet al suplimentului este disponibil online la http://www.rbej.com/supplements/4/S1.

Afilieri

1. TAP Pharmaceutical Products Inc., Lake Forest, Illinois, SUA

   Kristof Chwalisz, Ramesh Garg si Craig Winkel

2. Centrul regional de cercetare primara din Oregon, Universitatea de Stiinte a Sanatatii din Oregon, 97006, Beaverton, OR, SUA

   Robert Brenner & Ov Slayden

3. EnTec GmbH, Hamburg si Jena, Germania

   Walter Elger

4. Schorlemerallee 12B, 14195, Berlin-Dahlem, Germania

   Walter Elger

autorul corespunzator

Corespondenta cu Kristof Chwalisz.

Interesele concurente

Kristof Chwalisz, Ramesh Garg si Craig Winkel sunt angajati ai TAP Pharmaceutical Products Inc. Walter Elger si Kristof Chwalisz sunt inventatori ai mai multor brevete de asoprisnil. Robert Brenner are un acord de consultanta cu TAP Pharmaceutical Products Inc. Ov Slayden are un acord de consultanta cu Schering AG.

Contributiile autorilor

KC: a proiectat cea mai mare parte a studiilor clinice si moleculare cu asoprisnil; a redactat manuscrisul. RG a efectuat si evaluat studii de toxicologie la maimute. RB a efectuat si interpretat studii primate. Sistemul de operare a efectuat si interpretat studiile primate. Am participat la proiectarea studiilor clinice si la animale.

Toti autorii au revizuit critic manuscrisul si au aprobat versiunea finala.

Acest articol este publicat sub licenta pentru BioMed Central Ltd. Acesta este un articol de acces deschis distribuit in conditiile Licentei de recunoastere a Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0), care permite utilizarea, distribuirea fara restrictii, si reproducerea in orice mediu, cu conditia ca lucrarea originala sa fie citata in mod corespunzator.

Reimprimari si permisiuni