O comparatie cantitativa a metodelor de extractie a microfosililor din miezurile de gheata

Tabelul 1. Metode de extractie a microfosililor din gheata, grupate conform procedurii principale de eliminare a apei, cu indicarea utilizarii markerului

2.1. Tablete marker

Pentru a cuantifica pierderile in timpul diferitelor proceduri de extractie, am adaugat doua markere diferite la probe, unul inainte si altul dupa tratamentele fizice si chimice. Am folosit Lycopodium clavatum (lot lot 3862 cu 9666 spori pe comprimat ± 671 std.) Si tablete marker de eucalipt (numarul lot 106720 cu 13500 boabe de polen ± 210) furnizate de Universitatea din Lund (Maher, referinta Maher1981). Inainte de a continua extractia cu microfosil, am testat fiabilitatea comprimatelor marker amestecand o tableta de marker Lycopodium si o tableta de Eucaliptmarcator. Zece dintre aceste perechi de tablete markere au fost dizolvate in HCl 10% in urma procedurilor standard pentru palinologie (de exemplu, Moore si altele, Referinta Moore, Webb si Collison1991). Suspensiile markerului au fost montate pe lamele microscopice. Am calculat o suma de 1000 de boabe ( Lycopodium  +  Eucalyptus ) pentru a estima exactitatea raportului scontat dintre boabele de Lycopodium si Eucalyptus .

2.2. Metode de extractie microfosilice

2.3. Analiza polenului

S-a calculat o suma de polen de 500 de boabe pe esantion, cu exceptia probelor de gheata cu un grad inalt de alpine de la Colle Gnifetti, pentru care am ajuns la o suma de polen de 350 datorita concentratiilor scazute de polen. Identificarea polenului a fost realizata la un microscop usor la marire 400 × dupa Beug (referinta Beug2004) si colectia de referinta a Institutului de Stiinte a Plantelor din Universitatea Berna. Calculul procentului de polen se bazeaza pe suma de polen terestru, iar concentratiile au fost standardizate la un litru de apa. Markerii de licopodiu si eucalipt au fost numarati alaturi de polen si am obtinut o suma minima de 1000 de boabe de marker pentru fiecare proba.

2.4. Analiza numerica

Am estimat abaterea medie a pierderii markerului in procente fata de raportul ideal al markerului Lycopodium : Eucalyptus (0,72) pe baza continutului mediu al unei tablete marker cu o abatere standard a fiecarui marker pentru a indica intervalul de incertitudine al raportului pentru tablete (0,66– 0,78). Am calculat coeficientii de determinare ( R2) pentru raporturile de marcaj pentru fiecare metoda de extractie a esantioanelor de replica de zapada si pentru raportul de marcaj al mostrelor cu miez de gheata inalt alpin, precum si pentru procentele de polen ale celor doua exemplare de replici Colle Gnifetti din segmentul Colle-15, cu tot polenul tipuri> 1%, incluzand si excluzand taxonii de polen veziculat. Pentru testarea statistica a diferentelor potentiale dintre efectele metodelor de extractie, am efectuat ANOVA unidirectional urmat de un test post-hoc Tukey-Kramer pentru rapoartele de marker si procentele de policulic veziculat pentru toate cele 60 de probe de zapada grupate prin metode de extractie.

Am efectuat analize de ordonare pentru a vizualiza distanta dintre ansamblurile de polen ale celor 60 de probe de zapada. Lungimea scurta a primei axe (unitati dev 1.48 Std) a unei analize de corespondenta renuntata (DCA, pe segmente) pentru setul de date de procent de polen al esantioanelor de replica de zapada justifica utilizarea metodelor de ordonare liniara (ter Braak si Prentice, Referinta Ter Braak si Prentice1988). anunturi escorte constanta yiwu.0579.com Analiza componentelor principale (PCA, ter Braak si Smilauer, Referinta Ter Braak si Smilauer2002) a fost realizata pe baza unei matrice de corelatie pentru procentele de polen (toti taxoni> 1%), care este unitatea standard pentru prezentarea datelor de polen (Maher, Referinta Maher1981; Faegri si Iversen, Referinta Faegri si Iversen1989). In plus, am efectuat PCA cu aceeasi variabila explicativa bazata pe o matrice de covarianta pentru concentratii de polen (boabe l − 1) standardizate prin norma pentru a evalua diferentele absolute potentiale ale tipurilor de polen unice independent unul de celalalt (datele nu sunt prezentate). Ordonantele au fost efectuate folosind versiunea 4.5 a lui CANOCO (ter Braak si Smilauer, Referinta Ter Braak si Smilauer2002).

3.1. Fiabilitatea tabletei de marcare

Dat fiind faptul ca comprimatele s-au dizolvat complet in HCl, markerul adaugat nu a modificat calitatea probelor. In schimb, presupunem ca sporii markerului si polenul cresc calitatea adaugand mai multa masa la probe, contribuind astfel la masa si la intarirea peletelor organice formate la baza tuburilor de centrifuga (Moore si altele, Referinta Moore, Webb si Collison1991) . Tabletele contineau doar sporii si polenul declarati, iar screeningul tuturor diapozitivelor microscopice nu a obtinut materiale straine (de exemplu, alt polen, carbune), care ar putea rezulta din contaminare in timpul procesului de productie a tabletelor (vezi Festi si altii, Festi de referinta, Hoffmann si Luetscher2016 ). Raportul dintre licopodiu / eucaliptboabele au fost in toate cele 10 probe ale testului de fiabilitate a markerului in raportul scontat (0,66–0,78 Lycopodium / Eucalyptus ) care a confirmat faptul ca tabletele marker sunt utilizate de incredere pentru investigatiile noastre cantitative.

3.2. Comparatia metodelor de extractie a microfosililor cu probele standard de zapada

Toate cele 60 de probe au produs lamele de microfosil contabile. Raportul mediu de marker Lycopodium / Eucalyptus in esantioanele de zapada reproduse prelucrate cu metoda BRUGGER este de 0,56 (22,1% abatere medie de la raportul ideal de marcare, adica 0,72). Numarul sporilor numiti de Lycopodium este puternic corelat cu polenul de eucalipt numarat ( R 2 din 0,94; Fig. 2 si 3), ceea ce sugereaza ca aceasta pierdere de polen a dus la o schimbare sistematica (si deci predictibila) in concentratiile estimate de polen. Abiarea marcanta usor mai mare cu 24% (raport mediu = 0,55) este atinsa cu metoda SHORT bazata pe filtrare si 29,8% abatere (raport mediu = 0,51) cu metoda LIU aferenta, in timp ce R2 din 0,87 atins in ambele metode este oarecum redus comparativ cu metoda BRUGGER ( R2 din 0,94, Fig. 2). Metodele de extractie care implica multe etape de centrifugare fara inghetarea de jos (EICHLER, FESTI, YANG) au drept consecinta o deviatie medie a markerului mai ridicata si R2 mai scazut (Fig. 2 si 3, raportul markerului = 0,36–0,42, 41–50% abatere, R 2 = 0,81 –0.86) care sugereaza ca, in medie, un numar considerabil de licopodiusporii (si deci microfosilii vizati) se pierd in timpul indepartarii apei si al tratamentului chimic si ca variabilitatea pierderilor este mai mare cu aceste metode de extractie. Cu toate acestea, ANOVA pentru diferentele dintre raportul de marcaj intre metodele de extractie (Fig. 3) sugereaza ca numai BRUGGER si metoda EICHLER cu cel mai putin performant produc diferente semnificative statistic in raporturile medii.

Ansamblurile de polen din toate probele sunt dominate de tipul Picea abies , tipul Pinus sylvestris (ambele veziculate = polenul cu vezicii aeriene), Alnus si Poaceae cu cantitati mai mici de Betula , Plantago lanceolata- tip, Cyperaceae si micile boabe de polen din Castanea si Urtica ( Fig. 4). Picea abies si Pinus sylvestris-procentele si concentratiile de polen de tip sunt in general mai mari la esantioanele prelucrate cu evaporare (metode BRUGGER, LIU, YANG) sau pe baza de filtrare (SHORT), comparativ cu esantioanele prelucrate cu metode exclusiv centrifugate (EICHLER, FESTI), ceea ce sugereaza ca centrifugarea poate reduceti boabele de polen veziculate in comparatie cu boabele de polen nonvesiculate (Fig. 4). Cantitatea mare si relativ constanta de Urtica (diametrul bobului ~ 10-15 µm, abundenta de 15-20% in toate replicile din Jung-2) si Alnus , Poaceae si Betula(diametrul boabelor 20–30 µm) in toate esantioanele replicate indica faptul ca cele sase metode testate nu induc prejudecati legate de marimea boabelor de polen in intervalul mic pana la mediu. Evaluarea diferentelor in cantitatea de polen mare non-particulat (> 50 um, de exemplu Larix)nu a fost posibil, deoarece aceste tipuri de polen au fost prea rare in probele noastre de zapada. Concentratiile de polen din esantioanele replicate pentru zapada variaza intre 12000 si 65000 boabe l − 1 (in medie 26000 boabe l − 1), cu exceptia probelor Jung-4 si Jung-10, care contin concentratii de polen de cinci pana la 10 ori mai mari (Fig. 3 si 4). Polenul non-particulat arata doar o mica variabilitate intre esantioanele de zapada, in timp ce concentratiile de polen veziculate prezinta o variabilitate mult mai mare, care confirma ca polenul veziculat este in principal responsabil pentru diferentele dintre procentele de esantioane replicate si, prin urmare, si pentru diagrama principala a procentului de polen pentru arbori, arbusti. si ierburi.

Prima axa PCA pentru procentele de polen din esantioanele replicate pentru zapada explica 69,1% din varianta si separa probele care au folosit evaporarea (BRUGGER, LIU si YANG) si filtrarea (SCURT) de probele care au suferit multe etape de centrifugare fara inghetarea fundului (EICHLER) si metode FESTI). Aceste ultime esantioane contin cantitati in general mai mici de polen Picea abies (Fig. 5). A doua axa explica 13,6% din variatie si, eventual, reflecta Pinus sylvestris-abundenta tipului in probe. Astfel, variatia ridicata cumulativa explicata de cele doua axe (82,7%) sugereaza ca abundenta de polen veziculat in ansamblurile de polen poate fi puternic afectata de procedura de extractie a microfosililor.

• escorte tinere brasov
• publi24 escorte constanta
• escorte gorj publi24
• publi24 escorte braila
• escorte ieftine constanta
• escorte iasi forum
• cupluri escorte
• escorte rahova
• escorte mature timisoara
• escorte gay cluj
• escorte negrese
• escorte nasaud
• escorte baia
• escorte independente
• escorte buzau forum
• escorte baba novac
• escorte franta
• escorte bucuresti sector 2
• escorte pro
• escorte din iasi

Analizele cu valori absolute (concentratiile de polen din boabele l − 1) dau rezultate comparabile care confirma rezultatele de ordonare ale setului de date procentuale (datele nu sunt prezentate).

Boxplot-urile (Fig. 3) pentru procentele de polen veziculat grupate prin metode indica, de asemenea, o pierdere selectiva de polen veziculat cu metode bazate pe centrifugare fara inghetarea de jos (EICHLER si FESTI cu ~ 25%). De asemenea, se pare ca compozitia polenului dintre esantioane se caracterizeaza printr-o variabilitate usor mai mare in comparatie cu metodele bazate pe evaporare si filtrare. ANOVA pentru procente de polen veziculat grupate prin metode de extractie (Fig. 3) nu ofera dovezi pentru diferentele semnificative statistic intre esantioanele prelucrate cu metode de evaporare si filtrare (BRUGGER, LIU, SHORT si YANG). Pentru metodele bazate pe centrifugare EICHLER si FESTI, ANOVA nu ofera nici o dovada pentru diferentele semnificative statistic in procentele de polen veziculat. In orice caz, analizele indica diferente semnificative statistic intre aceste probe si cele prelucrate cu celelalte patru metode. Prin urmare, atat ANOVA, cat si examinarea vizuala a datelor sugereaza o diferenta distincta intre metodele bazate pe evaporare sau filtrare si metodele bazate doar pe centrifugare in ceea ce priveste procentul de polen veziculat, cu o pierdere mai mare de polen veziculat in EICHLER si Metode FESTI. In schimb, influenta diferitelor metode de extractie asupra raportului marker este mai putin distincta (Fig. 3). Acest lucru sugereaza un efect disproportionat al metodelor bazate doar pe centrifugare asupra polenului veziculat (adica metodele EICHLER si FESTI care implica 16 etape de centrifugare pentru 400 ml apa, Fig. 3). prin urmare, sugereaza o diferenta distincta intre metode pe baza de evaporare sau filtrare si metode bazate doar pe centrifugare in ceea ce priveste procentul de polen veziculat, cu o pierdere mai mare de polen veziculat in metodele EICHLER si FESTI. In schimb, influenta diferitelor metode de extractie asupra raportului marker este mai putin distincta (Fig. escorte orsova www.etypeservices.com 3). Acest lucru sugereaza un efect disproportionat al metodelor bazate doar pe centrifugare asupra polenului veziculat (adica metodele EICHLER si FESTI care implica 16 etape de centrifugare pentru 400 ml apa, Fig. 3). prin urmare, sugereaza o diferenta distincta intre metode pe baza de evaporare sau filtrare si metode bazate doar pe centrifugare in ceea ce priveste procentul de polen veziculat, cu o pierdere clar mai mare de polen veziculat in metodele EICHLER si FESTI. In schimb, influenta diferitelor metode de extractie asupra raportului marker este mai putin distincta (Fig. 3). Acest lucru sugereaza un efect disproportionat al metodelor bazate doar pe centrifugare asupra polenului veziculat (adica metodele EICHLER si FESTI care implica 16 etape de centrifugare pentru 400 ml apa, Fig. 3). influenta diferitelor metode de extractie asupra raportului marker este mai putin distincta (Fig. 3). Acest lucru sugereaza un efect disproportionat al metodelor bazate doar pe centrifugare asupra polenului veziculat (adica metodele EICHLER si FESTI care implica 16 etape de centrifugare pentru 400 ml apa, Fig. 3). influenta diferitelor metode de extractie asupra raportului marker este mai putin distincta (Fig. 3). Acest lucru sugereaza un efect disproportionat al metodelor bazate doar pe centrifugare asupra polenului veziculat (adica metodele EICHLER si FESTI care implica 16 etape de centrifugare pentru 400 ml apa, Fig. 3).

3.3. Validarea metodei BRUGGER cu probe de gheata cu grad inalt de alpin

Am aplicat metoda BRUGGER la probele de gheata de la ghetarul Colle Gnifetti cu o inalta alpina, deoarece a produs cea mai mica pierdere dintre toate abordarile utilizate in comparatia noastra cu replicile de zapada de la Jungfraujoch. Raportul mediu de marcare (0,57, abatere de 20,2% de la raportul ideal) la probele de gheata inalta alpina este foarte similar cu raportul mediu de marcat in esantioanele de replici de zapada prelucrate cu aceeasi metoda (0,56, 22,1%), ceea ce sugereaza pierderi minore de Licopodiu si, prin urmare, microfosilele. Corelatia usor mai mica intre sporii Lycopodium si polenul de eucalipt ( R2 = 0,78, Fig. 6a), in comparatie cu probele de zapada (Fig. 6a), poate fi explicata prin proprietatile inerente acestor probe specifice, de exemplu concentratii scazute de particule organice si anorganice insolubile care duc la pelete mai mici in timpul procesului de concentrare. Intr-adevar, lamelele microscopice din gheata contineau mai putine particule de praf decat cele provenite de la zapada.

Concentratiile de polen din probele de miez de gheata de la Colle Gnifetti sunt scazute in comparatie cu probele de zapada de la Jungfraujoch, cuprinse intre 310 si 18300 boabe l − 1 (media de 6600 boabe l − 1) fata de 12000–400000 boabe l 400 1 (respectiv 115000 boabe l − 1). Aceasta constatare poate reflecta diferenta altitudinala de 1000 m intre Colle Gnifetti (4450 m sl) si Jungfraujoch (3400 m sl), care mareste semnificativ distanta fata de vegetatie la altitudini inferioare (colina pana la centurile alpine intre ~ 200 si 3000 m asl; Ellenberg, Referinta Ellenberg1996) care produce semnalul palinologic. Procentele de polen pentru taxoni> 1% in cele doua probe replicate de Colle-15 sunt foarte asemanatoare, rezultand un R2 ridicat intre procentele de polen ale diferitelor taxe in aceste doua probe (0,88 pentru polen> 1% aparitie fara veziculat).Tip tip Pinus sylvestris care apare la 27% in Colle-15 si 10% in replica Colle-15, rezultand un R 2 mult mai mic (0,62, Fig. 6b), daca taxonii de polen veziculat sunt inclusi in setul de date (Fig. 6b). Acest lucru sugereaza o reproductibilitate ridicata a majoritatii taxonilor de polen (de exemplu, Poaceae si Castanea ). Morfologia veziculata a tipului de Pinus sylvestris poate influenta reproductibilitatea abundentei sale in comparatie cu alti taxoni de polen cu o morfologie nonviculata, in timp ce valorile Pinus cembra (2% fata de 0%, respectiv) sunt prea mici pentru a fi evaluate. Chiar daca puterea statistica a doua replici cu miez de gheata inalt alpin este limitata, aceste rezultate sustin cu tarie rezultatul reproducerilor de zapada, asa cum este discutat in sectiunea 3.2.

4.1. Necesitatea unei aplicatii de marcare

Adaugarea de markeri microfosili la probele de sediment palynologic a fost un standard in palinologie inca de la inceputul anilor ’70 (de exemplu Stockmarr, Reference Stockmarr1971; Moore si altii, Reference Moore, Webb si Collison1991; Dark and Allen, Reference Dark si Allen2005; Finsinger and Tinner, Reference Finsinger si Tinner2005; Maher si altii, Reference Maher, Heiri, Lotter, Birks, Lotter, Juggins si Smol2012; Brugger si altii, Referinta Brugger2016; Campbell si altii, Referinta Campbell, Fletcher, Hughes si Shuttleworth2016; Rey si altii, Referinta Rey2017). escorte hotel www.venneberg.biz Acest lucru permite estimarea cantitativa a polenului si a fluxurilor (Stockmarr, Reference Stockmarr1971; Birks and Gordon, Reference Birks si Gordon1985), care nu poate fi obtinut altfel decat daca se contorizeaza intregul esantion (von Post, Reference von Post1916; Welten, Reference Welten1944; Moore si altii, Referinta Moore, Webb si Collison1991). Adaugarea markerilor ajuta, de asemenea, la estimarea pierderilor in timpul extragerii polenului. Unele studii recente tind sa evite adaugarea de markeri la esantioanele palinologice din cauza costurilor, a fortei de munca suplimentare sau a problemelor presupuse de contaminare (Festi si altele, Referinte Festi, Hoffmann si Luetscher2016). Pe baza rezultatelor prezentate aici, putem respinge aceste speculatii cu privire la problemele de contaminare atunci cand folosim tablete marker disponibile, standardizate si verificate de calitate (de ex. Hoffmann si Luetscher2016). Pe baza rezultatelor prezentate aici, putem respinge aceste speculatii cu privire la problemele de contaminare atunci cand folosim tablete marcante disponibile, standardizate si verificate de calitate (de ex. Hoffmann si Luetscher2016). Pe baza rezultatelor prezentate aici, putem respinge aceste speculatii cu privire la problemele de contaminare atunci cand folosim tablete marker disponibile, standardizate si verificate de calitate (de ex.Tablete de licopodiu furnizate de Universitatea din Lund; Maher, 1981).

Rezultatele noastre arata clar ca pierderea de microfosil in timpul extractiei de polen din probe de gheata este inevitabila (adica> 20% din Lycopodiummarkerul este pierdut). Aceasta pierdere se produce in timp ce initial se reduce continutul de apa (de exemplu, evaporare, filtrare, centrifugare urmata de decantare), in timpul tratamentului chimic care implica etape inevitabile de centrifugare in toate metodele testate si dupa prelucrarea esantionului. Cantitatea foarte mica de polen din esantioanele de gheata si zapada nu este usor de extras din tuburile de centrifuga, pentru a fi fixata fara pierderi pe diapozitiv si devine partial acoperita sub marjele de alunecare a capacului microscopic. Aceste pierderi afecteaza puternic orice numar absolut de microfosili (de exemplu, polen, particule de carbune din probele cu miez de gheata) care nu adauga markeri. Astfel, aplicarea markerului este imperativa pentru a estima valori absolute realiste (concentratii, influx) si ca un control pentru pierderea totala a esantionului (Stockmarr, Referinta Stockmarr1971; Peck, Peck de referinta1974; Finsinger si Tinner,

4.2. Influenta proprietatilor specifice ale esantionului de gheata asupra extractiei de polen

Probele de gheata au proprietati specifice care pot explica diferentele in comportamentul microfosililor in timpul procesarii de laborator in comparatie cu probele sedimentare. Depunerea microfosililor pe ghetari este diferita de depunerea din arhivele de sedimente lac si mire. Polenul proaspat, sporii si alte microfosile (de exemplu, carbune) sunt acoperite direct de zapada dupa depunerea pe suprafata si incorporate in gheata. Acest lucru este spre deosebire de polenul depus in sedimentele lacului, care se instaleaza doar pe fundul lacului atunci cand este saturat de apa si suficient de dens pentru a se scufunda (Faegri si Iversen, Referinta Faegri si Iversen1989; Dark and Allen, Reference Dark si Allen2005). Un comportament special al polenului veziculat comparativ cu polenul non-particulat a fost demonstrat in studiile transecte efectuate in lacuri, cu sedimente de mal imbogatite in polen veziculat comparativ cu sedimentele din centrul lacului. Acest model se explica prin faptul ca polenul veziculat pluteste mult timp si este astfel transportat pe tarmul unde se acumuleaza (Ammann si Tobolski, Ammann de referinta si Tobolski1983). Comportamentul diferit al polenului veziculat si non-particulat a fost observat si in capcanele plutitoare de polen din lacuri (Giesecke si Fontana, Giesecke de referinta si Fontana2008). Experimentele de laborator controlate timpuriu asupra comportamentului plutitor al polenului au confirmat ca majoritatea polenului veziculat (de ex Comportamentul diferit al polenului veziculat si non-particulat a fost observat si in capcanele plutitoare de polen din lacuri (Giesecke si Fontana, Giesecke de referinta si Fontana2008). Experimentele de laborator controlate timpuriu asupra comportamentului plutitor al polenului au confirmat ca majoritatea polenului veziculat (de ex Comportamentul diferit al polenului veziculat si non-particulat a fost observat si in capcanele plutitoare de polen din lacuri (Giesecke si Fontana, Giesecke de referinta si Fontana2008). Experimentele de laborator controlate timpuriu asupra comportamentului plutitor al polenului au confirmat ca majoritatea polenului veziculat (de exPinus sp.) A plutit pe suprafata apei in paharele de sticla nemiscate timp de ore, in timp ce majoritatea polenului non-particulat proaspat (de exemplu, 95–100% Corylus , Quercus, Juniperus si Larix) s-a scufundat in primele 5 minute de la inceperea experimentului (Hopkins, Referinta Hopkins1950). escorte olx fjabello.com Prin urmare, presupunem ca polenul polenului veziculat a plutit pe suprafata apei dupa decongelarea probelor de gheata si s-a pierdut preferential in timpul decantarii ulterioare a tuburilor de centrifuga. O diferenta majora intre esantioanele de gheata si sedimentele este ca, in timp ce polenul este inghetat in gheata, polenul de sediment este imbibat in apa de-a lungul anilor pana la milenii, reducand potential capacitatea de plutire. Capacitatea mare de plutire a polenului veziculatelor bine conservate in gheata poate explica variabilitatea mai mare a veziculei in comparatie cu polenul non-particulat (Fig. 4). Aceasta constatare este importanta deoarece implica o partinire negativa asupra estimarilor concentratiei de polen veziculat din inregistrarile nucleelor ​​de gheata. Peck (referinta Peck1972), Davis si Brubaker (referinta Davis si Brubaker1973) si Holmes (referinta Holmes1990) au raportat diferente de timp de stabilire intre polenul non-particulat in functie de marime. Cu toate acestea, pe baza rezultatelor noastre, nu putem confirma o variabilitate mai mare a boabelor de polen cu diametre mici si densitati mai mici in comparatie cu boabele mai mari (de ex.Urtica si Castanea vs. Alnus si Poaceae).

In timp ce morfologia polenului veziculat este un avantaj evolutiv pentru polenizarea vantului si a apei (aceasta din urma deoarece flotabilitatea ajuta sa pluteasca in sus intr-o cadere lichida in ovule; Owens si altii, Owens de referinta, Takaso si Runions1998; Runions si altele, Runions de referinta, Rensing , Takaso si Owens1999), este un dezavantaj clar pentru prelucrarea in laborator a probelor palinologice. Acest lucru implica faptul ca probele de gheata dezghetate trebuie sa stea in jur de cateva zile pentru a extinde saturatia apei si timpul de scufundare pentru polen inainte de aplicarea etapelor de centrifugare. Acest timp de asteptare este inerent metodelor bazate pe evaporare (BRUGGER; LIU; YANG) unde polenul ramane in apa cateva zile in timpul evaporarii initiale. In mod similar, metode bazate pe filtrare (SCURT; sau metoda din Nakazawa si altele, Referinta Nakazawa2005) evita problema plutirii polenului in prima etapa de reducere a apei. Totusi, esantioanele de centrifugare pot ajuta, de asemenea, polenul veziculat sa se scufunde de pe o suprafata a apei prin umplerea vezicii de aer cu apa (Hopkins, Referinta Hopkins1950), ceea ce presupune ca cresterea timpului de centrifugare in fiecare etapa de centrifugare poate ajuta la cresterea numarului de polen veziculat scufundat.

Microfosilele provenite din probe de gheata nu sunt incorporate intr-o matrice, asa cum este tipic pentru esantioanele de sedimente din lacuri sau minere. Presupunem ca acest lucru cauzeaza pierderi de polen mai mari si mai variabile in timpul extragerii polenului din probe de gheata, in special in timpul decantarii tuburilor de centrifuga. Intr-adevar, diferentele de asamblare a polenului au fost mai mici la probele de sedimente, dupa cum se dovedeste printr-o comparatie tentativa cu mostre de sedimente replicate din Moossee, Elvetia (rezultate nepublicate). In mod similar, probele de zapada din Jungfraujoch, cu concentratii de praf mai mari, au o variabilitate mai mica a pierderii de polen decat probele de gheata inalt alpine provenite de la ghetarul Colle Gnifetti, probabil, deoarece formeaza o peleta mai stabila in partea de jos a tuburilor de centrifugare dupa centrifugare. Solutia noastra la aceasta problema este de a reduce la minimum pierderile de polen la probele de gheata prin imitarea unei matrice prin inghetarea prin soc a fundului tubului intotdeauna dupa centrifugare si inainte de decantare. Calitatea polenului nu a fost afectata de procedura de inghetare a socurilor. Cu toate acestea, observatiile noastre sugereaza ca concentratiile scazute de particule suspendate din probele cu miez de gheata inalt alpin in comparatie cu probele cu matrice de sedimente pot influenta comportamentul de scufundare in timpul centrifugarii. Compararea esantioanelor care sunt prelucrate cu protocoale de laborator identice, cu exceptia unui tratament cu alcool inainte de centrifugarea pentru a scadea tensiunea superficiala (metodele EICHLER si FESTI) indica o pierdere mai mica de polen cu un tratament cu alcool (FESTI), desi raporturile markerului nu sunt semnificativ mai mici conform statistici de comparatie (Fig. 3).

Datele noastre indica faptul ca pierderile cresc odata cu numarul de etape de centrifugare in crestere (Fig. 3) care sugereaza ca numarul de etape de centrifugare este crucial pentru pierderile din microfosil. Arhivele la distanta la altitudini mari (de exemplu, ghetari alpini inalti in Anzi de peste 6000 m altitudine; Liu si altele) sau latitudini mari (de exemplu, site-uri arctice, Short si Holdsworth, Referinte scurte si Holdsworth1985; Hicks si Isaksson, Referinte Hicks si Isaksson2006) solicita de obicei volume mari de gheata (de exemplu> 400 ml) din cauza concentratiilor scazute de polen. escorte iancului vacationvermont.com Concentratiile microfosililor pot fi, de asemenea, mai diluate in arhive cu rate mari de acumulare a zapezii, comune in unele lanturi montane (de exemplu, Neff si altele, Referinta Neff2012; Schwikowski si altii, Referinta Schwikowski, Schlappi, Santibanez, Rivera si Casassa2013; Mariani si altii, Referinta Mariani2014) .